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食用菌菌種生產技術規程 Code of practice for spawn production of edible mushroom

時間:2013-09-03 11:28:53  來源:  作者:

標準類別  NY/T 農業行業推薦標準
標準名稱  食用菌菌種生產技術規程 Code of practice for spawn production of edible mushroom

標準分類  種植業->水果蔬菜及制品
標準號  NY/T 528—2010

被替代標準號  NY/T 528—2002

頒布部門  中華人民共和國農業部

頒布日期  2010-05-20

實施日期  2010-09-01

關鍵字  食用菌、菌種生產、技術規程
標準內容  
1  范圍

本標準規定了食用菌菌種生產的場地、廠房設置和布局、設備設施、使用品種、生產工藝流程、技術要求、標簽、標志、包裝、運輸和貯存等。

本標準適用于不需要伴生菌的各種各級食用菌菌種生產。

2  規范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

GB 191  包裝儲運圖示標志(GB 191—2008,ISO 780:1997,MOD)

GB 9688  食品包裝用聚丙烯成型品衛生標準

GB/T 12728—2006  食用菌術語

NY/T 1742—2009  食用菌菌種通用技術要求

3  術語和定義

GB/T 12728—2006界定的術語,以及下列術語和定義適用于本文件。為了便于使用,以下重復列出了GB/T 12728—2006中的一些術語和定義。

3.1  食用菌  edible mushroom

可食用的大型真菌,包括食用、食藥兼用和藥用三大類用途的種類。

注:改寫GB/T 12728—2006,定義2.1.4。

3.2  品種  variety

經各種方法選育出來的具特異性、一致(均一)性和穩定性可用于商業栽培的食用菌純培養物。

[GB/T 12728—2006,2.5.1]

3.3  菌種  spawn

生長在適宜基質上具結實性的菌絲培養物,包括母種、原種和栽培種。

[GB/T 12728—2006,2.5.6]

3.4  母種  stock culture

經各種方法選育得到的具有結實性的菌絲體純培養物及其繼代培養物。也稱一級種、試管種。

[GB/T 12728—2006,2.5.7]

3.5  原種  mother spawn

由母種移植、擴大培養而成的菌絲體純培養物。也稱二級種。

[GB/T 12728—2006,2.5.8]

3.6  栽培種  planting spawn

由原種移植、擴大培養而成的菌絲體純培養物。栽培種只能用于栽培,不可再次擴大繁殖菌種。也稱三級種。

[GB/T 12728—2006,2.5.9]

3.7  種木  wood-pieces

采用一定形狀和大小的木質顆粒或樹枝培養的純培養物,也稱種粒或種枝。

注:改寫GB/T 12728—2006,定義2.5.24。

3.8  固體培養基  solid medium

以富含木質纖維素或淀粉類天然物質為主要原料,添加適量的有機氮源和無機鹽類,具一定水分含量的培養基。常用的主要原料有:木屑、棉籽殼、秸稈、麥粒、谷粒、玉米粒等,常用的有機氮源有麥麩、米糠等,常用的無機鹽類有硫酸鈣、硫酸鎂、磷酸二氫鉀等。固體培養基包括以闊葉樹木屑為主要原料的木屑培養基、以草本植物為主要原料的草料培養基、以禾谷類種子為主要原料的谷粒培養基、以糞草為主要原料的糞草發酵料培養基、以種粒或種枝為主要原料的種木培養基、以棉籽殼為主要原料的棉籽殼培養基等。

3.9  種性  characters of variety

食用菌的品種特性,是鑒別食用菌菌種或品種優劣的重要標準之一。一般包括對溫度、濕度、酸堿度、光線和氧氣的要求,抗逆性、豐產性、出菇遲早、出菇潮數、栽培周期、商品質量及栽培習性等農藝性狀。

注:改寫GB/T 12728—2006,定義2.5.4。

3.10  批次  spawn batch

同一來源、同一品種、同一培養基配方、同一天接種、同一培養條件和質量基本一致的符合規定數量的菌種。每批次數量母種≥50支、原種≥200瓶(袋)、栽培種≥2000瓶(袋)。

4  要求

4.1  技術人員

應有與菌種生產所需要的技術人員,包括檢驗人員。

4.2  場地選擇

4.2.1  基本要求

地勢高燥,通風良好,排水暢通,交通便利。

4.2.2  環境衛生要求

300m之內無規模養殖的禽畜舍、垃圾和糞便堆積場,無污水、廢氣、廢渣、煙塵和粉塵污染源,50m內無食用菌栽培場、集貿市場。

4.3  廠房設置和布局

4.3.1  設置和建造

4.3.1.1  總則

有各自隔離的攤曬場、原材料庫、配料分裝室(場)、滅菌室、冷卻室、接種室、培養室、貯存室、菌種檢驗室等。廠房從結構和功能上應滿足食用菌菌種生產的基本需要。

4.3.1.2  攤曬場

地面平整、光照充足、空曠寬闊、遠離火源。

4.3.1.3  原材料庫

防雨防潮,防蟲、防鼠、防火、防雜菌污染。

4.3.1.4  配料分裝室(場)

水電方便,空間充足。如安排在室外,應有天棚,防雨防曬。

4.3.1.5  滅菌室

水電安裝合理,操作安全,通風良好,排氣通暢、進出料方便,熱源配套。

4.3.1.6  冷卻室

潔凈、防塵、易散熱。

4.3.1.7  接種室

防塵性能良好,內壁和屋頂光滑,易于清洗和消毒,換氣方便,空氣潔凈。

4.3.1.8  培養室和貯存室

內壁和屋頂光滑,便于清洗和消毒;墻壁厚度適當,利于控溫、控濕,便于通風;有防蟲防鼠措施。

4.3.1.9  菌種檢驗室

水電方便,利于裝備相應的檢驗儀器和設備。

4.3.2  布局

應按菌種生產工藝流程合理安排布局,無菌區與有菌區有效隔離。

4.4  設備設施

4.4.1  基本設備

應具有磅秤、天平、高壓滅菌鍋或常壓滅菌鍋、凈化工作臺或接種箱、調溫設備、除濕設備、培養架、恒溫箱或培養室、冰箱或冷庫、顯微鏡等及常規用具。高壓滅菌鍋應使用經有資質部門生產與檢驗的安全合格產品。

4.4.2  基本設施

配料、分裝、滅菌、冷卻、接種、培養等各環節的設施應配套。冷卻室、接種室、培養室和貯存室都要有滿足其功能的基本配套設施,如控溫設施、消毒設施。

4.5  使用品種和種源

4.5.1  品種

從具相應技術資質的供種單位引種,且種性清楚。不應使用來歷不明、種性不清、隨意冠名的菌種和生產性狀未經系統試驗驗證的組織分離物作種源生產菌種。

4.5.2  種源質量檢驗

母種生產單位每年在種源進入擴大生產程序之前,應進行菌種質量和種性檢驗,包括純度、活力、菌絲長勢的一致性、菌絲生長速度、菌落外觀等,并做出菇試驗,驗證種性。種源出菇試驗的方法及種源質量要求,應符合NY/T 1742—2009中5.4的規定。

4.5.3  移植擴大

母種僅用于移植擴大原種,一支母種移植擴大原種不應超過6瓶(袋);原種移植擴大栽培種,一瓶谷粒種不應超過50瓶(袋),木屑種、草料種不應超過35瓶(袋)。

4.6  生產工藝流程

培養基配制→分裝→滅菌→冷卻→接種→培養(檢查)→成品。

4.7  生產過程中的技術要求

4.7.1  容器

4.7.1.1  使用原則

每批次菌種的容器規格要一致。

4.7.1.2  母種

使用玻璃試管或培養皿。試管的規格18mm×180mm或20mm×200mm。棉塞要使用梳棉或化纖棉,不應使用脫脂棉;也可用硅膠塞代替棉塞。

4.7.1.3  原種

使用850mL以下、耐126℃高溫的無色或近無色的、瓶口直徑≤4cm的玻璃瓶或近透明的耐高溫塑料瓶,或15cm×28cm耐126℃高溫符合GB 9688衛生規定的聚丙烯塑料袋。各類容器都應使用棉塞,棉塞應符合4.7.1.2規定;也可用能滿足濾菌和透氣要求的無棉塑料蓋代替棉塞。

4.7.1.4  栽培種

使用符合4.7.1.3規定的容器,也可使用≤17cm×35cm耐126℃高溫符合GB 9688衛生規定的聚丙烯塑料袋。各類容器都應使用棉塞或無棉塑料蓋,并符合4.7.1_3規定。

使用耐126℃高溫的具孔徑0.2μm~0.5μm無菌透氣膜的聚丙烯塑料袋,長寬厚為630mm×360mm×80μm,無菌透氣膜2個,大小35mm×35mm,或495mm×320mm×60μm,無菌透氣膜1個,大小35mm×35mm。

4.7.2  培養原料

4.7.2.1  化學試劑類

化學試劑類原料如硫酸鎂、磷酸二氫鉀等,要使用化學純或以上級別的試劑。

4.7.2.2  生物制劑和天然材料類

生物制劑如酵母粉和蛋白胨,天然材料如木屑、棉籽殼、麥麩等,要求新鮮、無蟲、無螨、無霉、潔凈、干燥。

4.7.3  培養基配方

4.7.3.1  母種培養基

一般應使用附錄A中第A.1章規定的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基(PDA)或第A.2章規定的綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基(CPDA),特殊種類需加入其生長所需特殊物質,如酵母粉、蛋白胨、麥芽汁、麥芽糖等,但不應過富。嚴格掌握pH。

4.7.3.2  原種和栽培種培養基

根據當地原料資源和所生產品種的要求,使用適宜的培養基配方(見附錄B),嚴格掌握含水量和pH值,培養料填裝要松緊適度。

4.7.4  滅菌

培養基配制后應在4h內進鍋滅菌。母種培養基滅菌0.11MPa~0.12MPa,30min。木屑培養基和草料培養基滅菌0.12MPa,1.5h或0.14MPa~0.15MPa,1h;谷粒培養基、糞草培養基和種木培養基滅菌0.14MPa~0.15MPa,2.5h。裝容量較大時,滅菌時間要適當延長。滅菌完畢后,應自然降壓,不應強制降壓。常壓滅菌時,在3h之內使滅菌室溫度達到100℃,保持100℃ 10h~12h。母種培養基、原種培養基、谷粒培養基、糞草培養基和種木培養基,應高壓滅菌,不應常壓滅菌。滅菌時應防止棉塞被冷凝水打濕。

4.7.5  滅菌效果的檢查

母種培養基隨機抽取3%~5%的試管,直接置于28℃恒溫培養;原種和栽培種培養基按每次滅菌的數量隨機抽取1%作為樣品,挑取其中的基質顆粒經無菌操作接種于附錄A.1規定的PDA培養基中,于28℃恒溫培養;48h后檢查,無微生物長出的為滅菌合格。

4.7.6  冷卻

冷卻室使用前要進行清潔和除塵處理,然后轉入待接種的原種瓶(袋)或栽培種瓶(袋),自然冷卻到適宜溫度。

4.7.7  接種

4.7.7.1  接種室(箱)的基本處理程序

清潔→搬入接種物和被接種物→接種室(箱)的消毒處理。

4.7.7.2  接種室(箱)的消毒方法

應藥物消毒后,再用紫外燈照射。

4.7.7.3  凈化工作臺的消毒處理方法

應先用75%酒精或新潔爾滅溶液進行表面擦拭消毒,之后預凈20min。

4.7.7.4  接種操作

在無菌室(箱)或凈化工作臺上嚴格按無菌操作接種。每一箱(室)接種應為單一品種,避免錯種,接種完成后及時貼好標簽。

4.7.7.5  接種點

各級菌種都應從容器開口處一點接種,不應打孔多點接種。

4.7.7.6  接種室(箱)后處理

接種室(箱)每次使用后,要及時清理清潔,排除廢氣,清除廢物,臺面要用75%酒精或新潔爾滅溶液擦試消毒。

4.7.8  培養室處理

在使用培養室的前兩天,采用無揚塵方法清潔,并進行藥物消毒殺菌和滅蟲。

4.7.9  培養

不同種類或不同品種應分區培養。根據培養物的不同生長要求,給予其適宜的培養溫度(多在室溫20℃~24℃),保持空氣相對濕度在75%以下,通風,避光。

4.7.10  培養期的檢查

各級菌種培養期間應定期檢查,及時揀出不合格菌種。

4.7.11  入庫

完成培養的菌種要及時登記入庫。

4.7.12  記錄

生產各環節應詳細記錄。

4.7.13  留樣

各級菌種都應留樣備查,留樣的數量應以每個批號3支(瓶、袋)。草菇在13℃~16℃貯存;除竹蓀、毛木耳的母種不適于冰箱貯存外,其他種類有條件時,母種于4℃~6℃貯存;原種和栽培種于1℃~4℃下,貯存至使用者購買后在正常生產條件下該批菌種出第一潮菇(耳)。

5  標簽、標志、包裝、運輸和貯存

5.1  標簽、標志

出售的菌種應貼標簽。注明菌種種類、品種、級別、接種日期、生產單位、地址電話等。外包裝上應有防曬、防潮、防倒立、防高溫、防雨、防重壓等標志,標志應符合GB 191的規定。

5.2  包裝

母種的外包裝用木盒或有足夠強度的紙盒,原種和栽培種的外包裝用木箱或有足夠強度的紙箱,盒(箱)內除菌種外的空隙用輕質材料填滿塞牢。盒(箱)內附使用說明書。

5.3  運輸

各級菌種運輸時不得與有毒有害物品混裝混運。運輸中應有防曬、防潮、防雨、防凍、防震及防止雜菌污染的設施與措施。

5.4  貯存

應在干燥、低溫、無陽光直射、無污染的場所貯存。草菇在13℃~16℃貯存;除竹蓀、毛小耳母種不適于冰箱貯存外,其他種類有條件時,母種于4℃~6℃、原種和栽培種于1℃~4℃的冰箱或冷庫內貯存。

附錄A

(規范性附錄)

母種常用培養基及其配方

A.1  PDA培養基(馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基)

馬鈴薯200g(用浸出汁),葡萄糖20g,瓊脂20g,水1000mL,pH自然。

A.2  CPDA培養基(綜臺馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基)

馬鈴薯200g(用浸出汁),葡萄糖20g,磷酸二氫鉀2g,硫酸鎂0.5g,瓊脂20g,水1000mL,pH自然。

附錄B

(規范性附錄)

原種和栽培種常用培養基配方及其適用種類

B.1  以木屑為主料的培養基配方

見B.1.1、B.1.2、B.1.3,適用于香菇、黑木耳、毛木耳、平菇、金針菇、滑菇、猴頭菇、真姬菇等多數木腐菌類。

B.1.1  闊葉樹木屑78%,麩皮20%,糖1%,石膏1%,含水量58%±2%。

B.1.2  闊葉樹木屑63%,棉籽殼15%,麩皮20%,糖1%,石膏1%,含水量58%±2%。

B.1.3  闊葉樹木屑63%,玉米芯粉15%,麩皮20%,糖1%,石膏1%,含水量58%±2%。

B.2  以棉籽殼為主料的培養基配方

見B.2.1、B.2.2、B.2.3、B.2.4,適用于黑木耳、毛木耳、金針菇、滑菇、真姬菇、楊樹菇、雞腿菇、猴頭菇、側耳屬等多數木腐菌類。

B.2.1  棉籽殼99%,石膏1%,含水量60%±2%。

B.2.2  棉籽殼84%~89%,麥麩10%~15%,石膏1%,含水量60%±2%。

B.2.3  棉籽殼54%~69%,玉米芯20%~30%,麥麩10%~15%,石膏1%,含水量60%±2%。

B.2.4  棉籽殼54%~69%,闊葉樹木屑20%~30%,麥麩10%~15%,石膏1%,含水量60%±2%。

B.3  以棉籽殼或稻草為主的培養基配方

見B.3.1、B.3.2、B.3.3,適用于草菇。

B.3.1  棉籽殼99%,石灰1%,含水量68%±2%。

B.3.2  棉籽殼84%~89%,麥麩10%~15%,石灰1%,含水量68%±2%。

B.3.3  棉籽殼44%,碎稻草40%,麥麩15%,石灰1%,含水量68%±2%。

B.4  發酵料培養基配方

見B.4.1、B.4.2,適用于雙孢蘑菇、雙環蘑菇、巴氏蘑菇等蘑菇屬的種類。

B.4.1  發酵麥秸或稻草(干)77%,發酵牛糞粉(干)20%,石膏粉1%,碳酸鈣2%,含水量62%±1%,pH7.5。

B.4.2  發酵棉籽殼(干)97%,石膏粉1%,碳酸鈣2%,含水量55%±1%,pH7.5。

B.5  谷粒培養基

小麥、谷子、玉米或高粱97%~98%,石膏2%~3%,含水量50%±1%,適用于雙孢蘑菇、雙環蘑菇、巴氏蘑菇等蘑菇屬的種類,也可用于側耳屬各種和金針菇的原種。

B.6  以種木(枝)為主料的培養基

闊葉樹種木70%~75%,附錄B.1.1配方的培養基25%~30%。適用于多數木腐菌類。

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