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畜禽細胞與胚胎冷凍保種技術規范 Procedures for cell and embryo cryopreservation of domestic animals

時間:2013-09-03 11:17:59  來源:  作者:

標準類別  NY/T 農業行業推薦標準
標準名稱  畜禽細胞與胚胎冷凍保種技術規范 Procedures for cell and embryo cryopreservation of domestic animals

標準分類  養殖業->綜合標準
標準號  NY/T 1900—2010

頒布部門  中華人民共和國農業部

頒布日期  2010-07-08

實施日期  2010-09-01

關鍵字  畜禽細胞、胚胎冷凍、保種技術、技術規范
標準內容  
1  范圍

本標準規定了用于保種的家畜精液、家畜卵母細胞、家畜胚胎和畜禽成纖維細胞冷凍保存技術要求。

本標準適用于家畜精液、家畜卵母細胞、家畜胚胎和畜禽成纖維細胞等遺傳物質冷凍保存和檢驗入庫。

2  規范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

GB 4143  牛冷凍精液

GB 20557  山羊冷凍精液

NY/T 1234  牛冷凍精液生產技術規程

NY/T 1 674  牛羊胚胎質量檢測技術規程

3  術語及定義

下列術語和定義適用于本文件。

3.1  超低溫保存  cryopreservation

在液氮中冷凍保存遺傳物質的技術。

3.2  卵母細胞  oocyte

來源于有腔卵泡具有繁殖能力的細胞。

3.3  成纖維細胞  fibroblast

以畜禽組織或胎兒為材料,體外培養、分離出的梭形或不規則形細胞。胞質近中央處有橢圓形胞核,胞體一般鋪展很開,細胞之間排列疏松,有較大細胞間隙。

3.4  供體  donor

提供精液、卵母細胞、成纖維細胞或胚胎的個體。

4  細胞冷凍保存

4.1  家畜精液冷凍保存

4.1.1  數量

每個品種保存精液不少于3000劑(豬0.5mL細管不少于30000劑),每個品種公畜不少于10頭,每個個體保存凍精不少于300劑。

4.1.2  供體

符合其品種特性、特征;三代以內無親緣關系,系譜清楚;健康、無傳染性疾病、遺傳疾病;有檢疫證明。

4.1.3  劑型

牛、羊、鹿、犬0.25mL細管;馬、驢0.5mL細管;豬0.5mL細管或5mL細管。

4.1.4  標記

標明生產單位、品種、供體號和生產日期。

4.1.5  精液冷凍

牛冷凍精液制作應按NY/T 1234的規定執行;山羊和綿羊冷凍精液制作按GB 20557的規定執行;其他家畜精液冷凍程序參照NY/T 1234和GB 20557的規定執行;不同家畜精液冷凍稀釋液配方見附錄B。

4.1.6  質量檢測

牛冷凍精液質量檢測按GB 4143的規定執行;山羊冷凍精液質量檢測按GB 20557的規定執行;其他家畜冷凍精液的質量檢測按GB 4143的規定執行,具體指標要求見附錄C。

4.2  卵母細胞冷凍保存

4.2.1  數量

每個品種保存卵母細胞不少于1000個,牛和綿羊每個品種母畜不少于50頭,每個個體保存卵母細胞不少于20個;其他家畜每個品種母畜不少于35頭,每個個體保存卵母細胞不少于30個。

4.2.2  供體

供體要求同4.1.2。

4.2.3  劑型

0.25mL細管,每支含卵母細胞不多于10個;OPS玻璃化冷凍每劑不多于5個。

4.2.4  標記

標記要求同4.1.4。

4.2.5  卵母細胞的采集與冷凍

卵母細胞的采集與冷凍參照附錄D。

4.2.6  質量檢測

卵母細胞冷凍一解凍后達到A級或B級。

4.3  成纖維細胞冷凍保存

4.3.1  數量

公畜禽不少于10頭(只),母畜禽不少于25頭(只),每個個體體外培養第3~4代細胞6管,細胞密度為1×105個/mL~5×105個/mL。

4.3.2  供體

供體要求同4.1.2。

4.3.3  劑型

2mL凍存管。

4.3.4  標記

標明生產單位、品種、細胞來源、供體號、性別、培養代數、凍存編號和凍存日期。

4.3.5  成纖維細胞的體外培養和冷凍保存

成纖維細胞的體外培養和冷凍保存方法參照附錄E。

4.3.6  質量檢測

臺盼藍染色檢查細胞存活力80%以上,生長曲線與冷凍前體外生長曲線相近,核型正常,無病原菌和支原體。具體方法參照附錄E。

5  胚胎冷凍保存

5.1  數量

每個品種冷凍保存體內胚胎不少于200枚,每個品種公畜不少于10頭,母畜不少于25頭,每個種公畜配種獲得的胚胎數不少于20枚,凍前胚胎質量為A級。

5.2  供體

供體要求同4.1.2。

5.3  劑型

0.25mL細管,每支細管1枚~2枚。

5.4  標記

標明生產單位、品種、公畜號、母畜號、胚胎發育期、冷凍方法、等級、數量和生產時間。

5.5  胚胎采集和冷凍保存

胚胎采集和冷凍保存方法參照附錄F。

5.6  質量檢測

牛、羊冷凍胚胎按NY/T 1674的規定執行,其他畜種參照NY/T 1674的規定執行。

6  品種資料及冷凍保存技術資料

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